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生物分離與純化技術(shù)

時(shí)間:2023-02-24 12:24:15 生物/化工/環(huán)保/能源 我要投稿
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生物分離與純化技術(shù)

  生物純化篇一:生物分離與純化技術(shù)期末材料

生物分離與純化技術(shù)

  一.填空題

  1.生物分離與純化的一般工藝過(guò)程:原料的選取與預(yù)處理,分離提取,精制和成品制作

  2.預(yù)處理的目的:1.改變發(fā)酵液(培養(yǎng)液)的物理性質(zhì),以利于固液分離。方法:加熱,凝聚和絮凝2.去除發(fā)酵液(培養(yǎng)液)中的部分雜質(zhì)以利于后續(xù)各步操作微濾的操作模式:常規(guī)過(guò)濾,錯(cuò)流過(guò)濾

  3.液膜的組成:膜溶劑(水和有機(jī)溶劑),表面活性劑,流動(dòng)載體和膜增強(qiáng)劑

  4.液膜的分類(lèi):乳狀液膜(流動(dòng)載體液膜和非流動(dòng)載體液膜),支撐液膜

  5.液膜分離的操作過(guò)程:制備液膜,液膜萃取,澄清分離,破乳

  6.常見(jiàn)的膜分離過(guò)程:a滲析b電滲析c微濾d超濾e反滲透f納濾g氣體分離

  7.過(guò)飽和溶液制備的四種方法:飽和溶液冷卻,部分溶劑蒸發(fā),化學(xué)反應(yīng)結(jié)晶法,解析法

  8.離子交換樹(shù)脂的命名:第一位數(shù)字代表產(chǎn)品的分類(lèi),第二位代表骨架,第三位代表數(shù)字為順序號(hào)

  9.雙水相萃取的工藝流程:目的產(chǎn)物的萃取,PEG的循環(huán),無(wú)機(jī)鹽的循環(huán)

  二.名詞解釋

  1.超臨界流體萃取:是一種新型的萃取分離技術(shù),是利用超臨界流體作為萃取劑,對(duì)物質(zhì)進(jìn)行溶解的和分離的過(guò)程。2.交聯(lián)度和交換容量的定義:1.表示離子交換樹(shù)脂中交換劑的容量,如聚苯乙烯型樹(shù)脂,交聯(lián)度以二乙烯苯在樹(shù)脂母體總質(zhì)量中所占百分?jǐn)?shù)表示2.是每克干燥的離子交換樹(shù)脂或每毫升完全溶脹的離子交換樹(shù)脂所能吸附的一價(jià)離子的毫摩爾數(shù),是表示樹(shù)脂離子交換能力的主要參數(shù),實(shí)際上是表示樹(shù)脂活性基團(tuán)的數(shù)量多少的參數(shù)。

  3.濃縮:低溶度溶液通過(guò)除去溶劑變?yōu)楦呷芏热芤旱倪^(guò)程干燥:從濕的固體生化藥物中除去水分或溶劑而獲得相對(duì)或絕對(duì)干燥制品的工藝過(guò)程。4.鹽析:是指溶液中加入無(wú)機(jī)鹽類(lèi)而使某種物質(zhì)溶解度降低而析出的過(guò)程。

  5.有機(jī)溶劑沉淀法:利用與水互溶的有機(jī)溶劑(如甲醇、乙醇、丙酮等)能使蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低而沉淀的方法

  6.色譜法:是一種物理的分離方法,利用多組分混合物的中各組分物理化學(xué)性質(zhì)的差別,使各組分以不同的程度分布在兩個(gè)相中

  7.中毒:由于活性炭是一種強(qiáng)吸附劑,對(duì)氣體吸附能力很大,氣體分子占據(jù)了活性炭的吸附表面,會(huì)造成活性炭中毒

  8.大網(wǎng)格聚合物吸附劑:又名大孔吸附樹(shù)脂,是一種有機(jī)高聚物,具有與大網(wǎng)格離子交換樹(shù)脂相同的大網(wǎng)格骨架,一般為白色球形顆粒。

  9.正反相色譜的定義:正:流動(dòng)相極性小于固定相的分配色譜法,反:流動(dòng)相極性大于固定相極性的分配色譜法

  三.簡(jiǎn)答題

  一.生物分離與純化技術(shù)的特點(diǎn)1.目的產(chǎn)物濃度低,純化難度大原料液中目的產(chǎn)物的濃度一般都很低,有時(shí)甚至是極微量的2.活性物質(zhì)性質(zhì)不穩(wěn)定,操作過(guò)程易失活,生物物質(zhì)的生理活性大多是在生物體內(nèi)的溫和條件下維持并發(fā)揮作用的,目的產(chǎn)物大多數(shù)對(duì)熱酸堿重金屬PH以及多種理化因素都比較敏感,容易失活。3.生物材料中生化組分?jǐn)?shù)量大,分離困難目的產(chǎn)物與雜質(zhì)的理化性質(zhì)如溶解度相對(duì)分子質(zhì)量等電點(diǎn)等往往比較相近,所以分離與純化較難4.生物材料容易變質(zhì),保存困難,生物材料容易腐敗,染菌,被微生物的活動(dòng)所分解或被自身的酶所破壞,甚至機(jī)械攪拌,金屬器械,空氣,日光等對(duì)生物物質(zhì)的活性都會(huì)發(fā)生影響5生物產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)高,生物產(chǎn)品一般用作醫(yī)藥,食品和化妝品,與人類(lèi)生命息息相關(guān)。因此要防止有害物質(zhì)在操作過(guò)程中進(jìn)入。

  二.生物分離與純化的發(fā)展方向:1.研究和開(kāi)發(fā)新型和經(jīng)濟(jì)高效的分離純化技術(shù)(1)新型分離介質(zhì)的研制,分離介質(zhì)的性能對(duì)提高分離效率起到關(guān)鍵作用,特別是工業(yè)大生產(chǎn),介質(zhì)的機(jī)械強(qiáng)度是工藝設(shè)計(jì)時(shí)要考慮的重要因素(2)膜分離的推廣應(yīng)用,膜分離具有選擇性好,分離效率高,節(jié)約能耗等優(yōu)點(diǎn)。(3)提高分離過(guò)程的選擇性,主要是應(yīng)用分子識(shí)別與親和作用來(lái)提高大規(guī)模分離技術(shù)的精度,利用生物分離作用的高度特異性與其他分離技術(shù)如:膜分離,雙水相萃取等。(4)強(qiáng)化生物分離過(guò)程的研究,生物分離過(guò)程的優(yōu)化能產(chǎn)生顯著的經(jīng)濟(jì)效益,但大多數(shù)生物分離過(guò)程目前尚處于經(jīng)驗(yàn)狀態(tài),對(duì)其機(jī)理缺乏必要的認(rèn)識(shí)2.生物工程上游技術(shù)與下游技術(shù)相結(jié)合,生物工程作為一個(gè)整體,上,中,下游要互相配合,為了利于

  目的產(chǎn)物的分離與純化,上游的工藝設(shè)計(jì)應(yīng)盡量為下游的分離純化創(chuàng)造條件。

  三.雜質(zhì)的去除方法1.雜蛋白的去除方法a等電沉淀法,蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最小,能沉淀而除去b變性沉淀,蛋白質(zhì)從有規(guī)則的排列變成不規(guī)則結(jié)構(gòu)的過(guò)程稱(chēng)為變性,變性蛋白質(zhì)在水中的溶解度較小而產(chǎn)生沉淀c吸附利用吸附作用能有效的除去雜蛋白質(zhì)2.不溶性多糖的去除方法,當(dāng)發(fā)酵液中含有較多不溶性多糖時(shí),粘度增大,固液分離困難,可用酶將它轉(zhuǎn)化為單糖一提高過(guò)濾速度3.高價(jià)金屬離子的去除方法,去除鈣離子,常用草酸鈉或草酸,去除鎂離子,常用草酸

  四.制備性超離心與分析性超離心的區(qū)別1.主要目的是最大限度的從樣品中分離高純度目標(biāo)組分,進(jìn)行深入的生物化學(xué)研究,有三種方法:差速離心法,該法分辨率不高,利用不同的粒子在離心力場(chǎng)中沉降的差別,在同一離心條件下,沉降速度不同,形成不同的粒子部分沉淀。速率區(qū)帶離心法,該法僅用于分離有一定沉降系數(shù)差的粒子,與粒子密度無(wú)關(guān)。等密度離心法,一般用于物質(zhì)的大小相近,而密度差異較大時(shí)。2.主要目的是為了研究生物大分子的沉降特性和結(jié)構(gòu),而不是專(zhuān)門(mén)手收集某一特定成分。它使用了特殊的轉(zhuǎn)子和檢測(cè)手段,以便連續(xù)監(jiān)視物質(zhì)在一個(gè)離心場(chǎng)中的沉降過(guò)程。

  五、萃取劑的選擇原則或依據(jù):1萃取劑分子至少有一個(gè)萃取功能基,通過(guò)它與被萃取物結(jié)合形成萃合物。常見(jiàn)的萃取功能基是O,N,P,S.以氧功能基萃取的為多2.萃取劑分子中必須有相當(dāng)長(zhǎng)的鏈烴或芳烴,其目的是使萃取劑及萃合物容易溶于有機(jī)溶劑,而難溶于水相。

  六.超臨界流體萃取的優(yōu)點(diǎn):1.萃取分離合二為一,不存在物料的相變過(guò)程,不需回收溶劑,操作方便不僅萃取效率高,而且能耗較少,節(jié)約成本2.壓力和溫度都可以成為調(diào)節(jié)萃取過(guò)程的參數(shù),壓力固定,改變溫度可將物質(zhì)分離,反之亦然。工藝流程短,耗時(shí)少,對(duì)環(huán)境無(wú)污染,萃取可循環(huán)使用3.萃取溫度低,可有效的防止熱敏性成分的氧化和逸散,完整保留生物活性,而且能把高沸點(diǎn),低揮發(fā)度,容易熱解的物質(zhì)在其沸點(diǎn)溫度一下萃取出來(lái)4.臨界CO2流體常態(tài)下是氣態(tài),無(wú)毒有效的避免了傳統(tǒng)提取條件下溶劑毒性的強(qiáng)留,同時(shí)也防止了對(duì)人體的毒害和對(duì)環(huán)境的污染5.49超臨界流體的極性可以變化,一定溫度條件下,只要改變壓力或加入適宜的夾帶劑即可提取不同極性的物質(zhì),可選擇性范圍廣

  七.鹽析原理,現(xiàn)以蛋白質(zhì)為例:1.高濃度的中性鹽溶液中存在大量的帶電荷的鹽離子,他們能中和蛋白質(zhì)分子的表面電荷,使蛋白質(zhì)分子間的靜電排斥作用減弱甚至消失而能相互靠攏,聚集起來(lái)2.中性鹽的親水性比蛋白質(zhì)大,它會(huì)搶奪本來(lái)與蛋白質(zhì)結(jié)合的自由水,使蛋白質(zhì)表面的水化層被破壞,導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子之間的相互作用增大而發(fā)生聚集,從而沉淀析

  八有機(jī)溶劑沉淀機(jī)理:1.加入有機(jī)溶劑后,會(huì)使有機(jī)溶劑的介電常數(shù)降低,而使溶質(zhì)分子(蛋白質(zhì)分子)之間的靜電引力增加,從而促使它們互相聚集,并沉淀出來(lái)2.水溶性的有機(jī)溶劑的親水性強(qiáng),它會(huì)搶奪本來(lái)與親水溶質(zhì)結(jié)合的自由水,使其表面的水化層被破壞,導(dǎo)致溶質(zhì)分子之間的相互作用增大而發(fā)生聚集,從而沉淀析出。

  九.結(jié)晶的一般方法:1鹽析法主要用于大分子如:蛋白質(zhì),酶,多肽等物質(zhì)的結(jié)晶,因?yàn)檫@些大分子不耐熱,對(duì)PH變化及許多有機(jī)溶劑的使用非常敏感a加固體鹽法:酵母醇脫氫酶的結(jié)晶b加飽和鹽溶液的方法:牛胰核糖核酸酶的結(jié)晶c羊胰蛋白酶的結(jié)晶2.有機(jī)溶劑結(jié)晶法a直接加有機(jī)溶劑結(jié)晶的方法:丙氨酸的結(jié)晶,從層析上收集已達(dá)低層析的純的丙氨酸溶液,合并后減壓濃縮,趁熱加入乙醇,晶體析出b利用揮發(fā)性溶劑蒸發(fā)結(jié)晶方法3.等電點(diǎn)結(jié)晶法,多用于一些兩性物質(zhì)4.其他a溫度差法b加入金屬離子法,如鐵蛋白的結(jié)晶

  十,離子交換樹(shù)脂的結(jié)構(gòu):1.惰性,不溶的具有三維空間立體結(jié)構(gòu)的骨架,成為載體或骨架

  2.與載體連成一體的,不能移動(dòng)的活性基團(tuán),又稱(chēng)功能基團(tuán)3.與功能基團(tuán)帶相反電荷的可移動(dòng)活性離子,又稱(chēng)平衡離子或可交換離子,當(dāng)樹(shù)脂處在溶液中時(shí),活性離子可在樹(shù)脂的骨架中進(jìn)進(jìn)出出,與溶液中的同性離子發(fā)生交換過(guò)程。

  十一離子交換樹(shù)脂的分類(lèi):1。按樹(shù)脂骨架的主要成分分a聚苯乙烯型樹(shù)脂b聚苯烯酸型樹(shù)

  脂c多乙烯多胺-環(huán)氧氯苯烷樹(shù)脂d酚醛型樹(shù)脂2.按骨架的物理結(jié)構(gòu)分a凝膠型樹(shù)脂b大網(wǎng)絡(luò)樹(shù)脂c均孔樹(shù)脂3按活性基團(tuán)分類(lèi)(1)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂a強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂b弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(2)陰離子交換樹(shù)脂a強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂b弱堿性陰離子交換樹(shù)脂

  十二.色譜法的特點(diǎn):.a分離效率高,是所有分離純化技術(shù)中最高的,尤其適合于極復(fù)雜混合物的分離b應(yīng)用范圍廣,從極性-非極性,離子型到-非離子型,小分子到大分子等都可用c選擇性強(qiáng),在色譜分離中既可選擇不同的色譜方法,也可選擇不同的固定相和流動(dòng)性狀態(tài)d設(shè)備簡(jiǎn)單,操作方便,且不含強(qiáng)烈的操作條件,因而不容易使物質(zhì)變性,特別使用于穩(wěn)定的大分子有機(jī)化合物

  十三.高效液相色譜的特點(diǎn):1.高壓,供液壓力和進(jìn)樣壓力都很高,一般100kg/cm2,甚至達(dá)500kg/cm2.2。高速,可達(dá)1-10ml/min.個(gè)別可達(dá)100ml/min,一般在一小時(shí)內(nèi)完成多組分的分離3.高靈敏度,采用了基于光學(xué)原理的檢測(cè)器4.高效,每米柱子柱效可達(dá)5000塔板以上,有時(shí)一根可分離100個(gè)以上5.適用范圍廣,通常在室溫下工作

  十四.膜分離的技術(shù)特點(diǎn):1.易于操作。常溫下可連續(xù)使用,可直接放大,易于自動(dòng)化2.成本低,壽命長(zhǎng)。有些膜產(chǎn)品壽命可達(dá)10年以上,維護(hù)方便,能耗少3.高效4.常溫下操作無(wú)相態(tài)變化,分離精度高,沒(méi)有二次污染5.模材質(zhì)的價(jià)格比較高6.操作過(guò)程中膜面容易被污染,導(dǎo)致膜性能降低7.膜的耐藥性,耐熱性,耐溶劑性能有限。

  十五.微濾的分離機(jī)理1.表面層截留a機(jī)械截留作用指膜具有截留比他孔徑大或孔徑相當(dāng)?shù)奈⒘5入s志的作用。此即篩分作用b物理作用或吸附截留作用除了要考慮篩分過(guò)程中的孔徑因素之外,還要考慮吸附和電性能的影響c架橋作用通過(guò)電鏡可以觀察到。在孔的入口處,微粒因架橋作用也被截留2.膜內(nèi)部截留:將微粒截留在膜內(nèi)部而不是在膜的表面,對(duì)于表面層截留而言,其過(guò)程接近于絕對(duì)過(guò)濾,容易清洗,但雜質(zhì)捕捉量相對(duì)于內(nèi)部截留較少,而對(duì)于膜內(nèi)部截留而言,雜質(zhì)捕捉量較多,但不容易清洗,多屬于一次性使用。

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